制藥行業(yè)小微樣品澄清度的測定

???作者：肖時俊

1、背景

年國家藥典委員會（原名衛(wèi)生部藥典委員會成立于1950年）根據(jù)《中華人民共和國藥品管理法》的規(guī)定，負(fù)責(zé)組織編纂《中華人民共和國藥典》及制定、修訂國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，是法定的國家藥品標(biāo)準(zhǔn)，由國家食品藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)頒布實(shí)施。新藥典中發(fā)布了對于藥品澄清度的檢測要求，它將澄清度由清到濁規(guī)定了0.5-4（見表1）5個澄清度級號。

這個指標(biāo)實(shí)際上是檢測了藥品中雜質(zhì)的情況，是衡量藥品質(zhì)量的一個標(biāo)準(zhǔn)，因此規(guī)定了藥品必須達(dá)到某一個級別才能作為合格藥品。這個指標(biāo)并不僅僅限于溶液藥品，固體藥品同樣也會有澄清度要求，它通過將固體藥品溶解于特定溶液后檢查其澄清度，從而確定藥品質(zhì)量。例如常用的鎮(zhèn)靜劑和治療失眠藥片佐匹克隆片，藥典規(guī)定其澄清度不得高于2號濁度標(biāo)夜。

事實(shí)上，澄清度這個指標(biāo)是最常見的幾個藥品不合格項(xiàng)目之一，由于澄清度不合格而導(dǎo)致問題也時常見諸于報端。因此如果生產(chǎn)的藥品有澄清度要求，藥廠QC部門一定會檢測這個指標(biāo)。藥典規(guī)定了兩種檢測方法。一種方法為目視比濁法，即預(yù)先配制好5個級號的濁度標(biāo)液，然后在一定光線下進(jìn)行觀測，但是存在兩個問題，一是不同日期的樣品澄清度沒有量化的數(shù)據(jù)；二是因每個化驗(yàn)人員的評判標(biāo)準(zhǔn)不一，當(dāng)需要換班組分析，樣品5個級號的濁度標(biāo)液的濁度值（范圍大概是0-40NTU），然后再檢測藥品的濁度值，即可得到藥品的澄清度級號。這個方法簡單而準(zhǔn)確，也消除了人為誤差。HACH公司的2100N和2100AN兩款濁度儀，在這方面可以完全滿足采用儀器法確定藥品澄清度的要求。

但是在實(shí)際應(yīng)用過程中，哈希公司的工程師發(fā)現(xiàn)由于大多數(shù)藥品價格昂貴，用戶采集的檢測樣品量較少，而2100N和2100AN濁度儀一次測試需要約30mL的樣品量，用戶希望盡可能的減少測試用的最小樣品量。鑒于此，哈希的工程師利用2100N和2100AN濁度儀，開發(fā)了可以應(yīng)用于制藥行業(yè)小微樣品濁度測試的方法，僅需要2.5mL的樣品量，即可確定藥品的澄清度。該方法也可用于其它有小微樣品濁度測試需求的行業(yè)。

2、HACH解決方案

哈希公司的應(yīng)用工程師根據(jù)藥典中澄清度標(biāo)液的配置方法（見附錄Ⅸ B），逐級稀釋配置藥典階梯樣0.5-4號標(biāo)液，利用哈希2100系列濁度儀，通過配置梯度濁度標(biāo)液自建工作曲線，得到樣品的濁度測定值與理論值有良好的線性關(guān)系。

a)利用濁度儀制作的工作曲線來標(biāo)定藥典澄清度標(biāo)液，標(biāo)定結(jié)果如下：

b)利用該曲線進(jìn)行樣品的測定，換算為澄清度級號來判斷藥品是否合格。

以某藥企為例，用戶待測藥品為腫瘤單抗新藥，市場售價每毫升超萬元，檢測成本高昂。哈希公司提供的解決方案，每次檢測僅需2.5 ml，大大節(jié)省用戶質(zhì)檢成本。該藥品藥典要求澄清度級號為3號（18.4 NTU），實(shí)測結(jié)果濁度值為15.4 NTU，低于藥典要求，證明該藥品合格。

溶液澄清度

中國藥典：

附錄Ⅸ B澄清度檢查法

本法系在室溫條件下，將用水稀釋至一定濃度的供試品溶液與等量的濁度標(biāo)準(zhǔn)液分別置于配對的比濁用玻璃管(內(nèi)徑 15 – 16 mm，平底，具塞，以無色、透明、中性硬質(zhì)玻璃制成)中，在濁度標(biāo)準(zhǔn)液制備5分鐘左右后，在暗室內(nèi)垂直同置于傘棚燈下，照度為1000 lx，從水平方向觀察、比較；用以檢查溶液的澄清度或其渾濁程度。除另有規(guī)定外，供試品溶解后應(yīng)立即檢視。 品種項(xiàng)下規(guī)定的“澄清”，系指供試品溶液的澄清度相同于所用溶劑，或未超過 0.5 號濁度標(biāo)準(zhǔn)液?！皫缀醭吻濉眲t指供試品溶液的濁度介于0.5號至1號濁度標(biāo)準(zhǔn)液的濁度之間。
濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 稱取于105 ℃干燥至恒重的硫酸肼1.00 g，置100 mL量瓶中，加水適量使溶解，必要時可在 40 ℃的水浴中溫?zé)崛芙?，并用水稀釋至刻度，搖勻，放置 4 – 6 小時；取此溶液與等容量的 10%烏洛托品溶液混合，搖勻，于 25 ℃避光靜置24小時，即得。本液置冷處避光保存，可在兩個月內(nèi)使用，用前搖勻。
濁度標(biāo)準(zhǔn)原液的制備 取濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液 15.0 mL，置 1000 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，取適量，置1 cm吸收池中，照紫外-可見分光光度法(附錄Ⅳ A)，在550 nm的波長處測定，其吸光度應(yīng)在0.12 – 0.15范圍內(nèi)。本液應(yīng)在48小時內(nèi)使用，用前搖勻。
濁度標(biāo)準(zhǔn)液的制備 取濁度標(biāo)準(zhǔn)原液與水，按下表配制，即得。本液應(yīng)臨用時制備，使用前充分搖勻。